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什么是解冻血清的最佳方法?
血清在 2-8°C 下解冻以防止降解;或者,它可以在室温下解冻并定期搅拌以重新悬浮内容物。
解冻的血清在加入细胞培养基之前应充分混合。
高于 37°C 的温度会加速关键血清因子的降解,从而影响血清性能,在实验室中应避免。
血清中的沉淀物是什么?
解冻或长时间冷冻和/或冷藏后可能会出现混浊和絮状物质。我们的经验表明,这些修饰不会影响血清的生物学性能。
一些沉淀是由纤维蛋白引起的:
我们的采集程序和快速冷冻可能会在血清中留下一些纤维蛋白原。纤维蛋白原是凝块形成蛋白纤维蛋白的可溶性前体。纤维蛋白可能在解冻或热灭活后出现。纤维蛋白不会改变血清促进细胞生长的能力。建议使用未经处理(过滤或离心)的血清。
一些沉淀是由磷酸钙引起的:
在 37°C 下长时间孵育的血清会变得混浊并可能出现沉积物。它们由钙和磷组成。据我们所知,这不会改变细胞培养物中血清的性能。
血清需要加热灭活吗?
对于大多数细胞培养应用,不推荐热灭活血清。热灭活会降解补体蛋白,这可能会干扰免疫分析。长时间加热血清会减少或破坏生长因子,并增加沉积物的形成,这些沉积物通常被误认为是微生物污染。
血清应该如何热灭活?
首先在 2-8°C 下解冻血清和对照血清瓶。
搅拌瓶装血清,避免解冻过程中形成沉淀物,然后将其放入调至80°C的水浴中。
一旦控制瓶温度达到50°C,将恒温槽调至70°C;当瓶子温度达到 55°C 时,将恒温器更改为 60°C。
当血清达到 56°C 的温度时,使用计时器(30 分钟是注册时间)并将水浴的恒温器更改为 56°C。在这 30 分钟内,定期检查温度并通过调节恒温器、添加一些冷水以及是否降低盖子来保持温度稳定。每 5 到 10 分钟搅拌一次血清。
将血清在室温下保持 30 分钟,然后将血清冷冻在 -20°C。
注:
。搅拌对于良好的血清质量至关重要。如果血清没有正确混合,会出现盐、蛋白质和脂质的沉淀物,并形成结晶和絮凝沉积物。这些沉积物对细胞培养无毒,但会影响血清外观和稠度。
. 长时间加热血清会破坏生长促进剂,这也会导致沉积物形成。
血清在 +2 至 +8°C 之间可以储存多长时间?
血清可在 +2 至 +8°C 之间储存长达 8 周而不会降低其性能 (*)。
Biowest 的内部研究表明,在 26 周的储存期间(+2 至 +8°C),血清促进细胞生长的能力没有显着改变。
(*) Art to Science,第 19 卷,第 2 期,“冷藏温度 (2-8°C) 下的血清稳定性"。
血清的推荐储存温度是多少?
血清应冷冻保存并避光。推荐的存储温度为 -10°C 至 -40°C。在低于 -40°C 的温度下,瓶子可能会变脆,增加破裂的风险。
胰蛋白酶产品的颜色并不总是相同是否正常?
一些胰蛋白酶制剂含有酚红。由于产品与干冰一起运输,因此 包装中可能会积聚大量 CO 2。这种 CO 2 可能会进入溶液并稍微降低 pH 值,呈现橙色(pH 值 6.5 左右)与粉红色(pH 值 7.3 左右)的颜色。该溶液,如果橙色(酸性)仍然可以按原样使用,或者可以添加氢氧化钠来调节 pH 值。
四环素对 FBS 在细胞生物学中的意义
四环素是一类广谱抗生素,通过阻断氨酰基-tRNA 与核糖体的结合来抑制细菌蛋白质合成。由于对抗生素抗性微生物发展的日益关注,欧盟在 1970 年代初期禁止使用四环素作为生长促进剂。然而,在世界其他地方,四环素仍然是家畜常用的抗生素之一。自 1992 年以来,四环素控制的转录激活系统,或通常称为“Tet-Off"和“Tet-On"系统,已被用于在全球实验室使用的细胞系模型中诱导哺乳动物表达。在 Tet-Off 系统中,如果存在四环素,则基因表达会被沉默,并且通过从培养基中去除四环素来诱导表达。反之亦然,
两种系统对 FBS 中发现的甚至少量四环素都非常敏感。因此,如果研究人员使用这些工具来控制他的细胞培养模型中的基因表达,那么供应*不含四环素的 FBS 就非常重要。
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为什么只选择AB血型?
来自 AB 型供体的人血清缺乏针对 A 和 B 血型抗原的抗体。因此,它最大限度地减少了免疫反应性,因为大多数人类血清使用者都在处理来自免疫系统的细胞。
为什么人类血清只存在于男性供体中?
怀孕的妇女可能会产生针对父亲细胞和/或胎儿细胞上携带的主要组织相容性类 (MHC) 抗原的抗体。男性捐赠者不存在此类风险。
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